domingo, 28 de setembro de 2008

Relatório: Extracção de DNA de células vegetais - de Fábio Teixeira

Objectivo

Pretende-se conhecer técnicas de extracção de DNA das células.
E também compreender o processo necessário à extracção do DNA.


Introdução
O DNA ou ADN, é o ácido desoxirribonucleico, é um composto orgânico cujas moléculas contêm as instruções genéticas que coordenam o desenvolvimento e funcionamento de todos os seres vivos e alguns vírus. O seu principal papel é armazenar as informações necessárias para a construção das proteínas. Os segmentos de DNA que são responsáveis por carregar a informação genética são denominados genes. O restante da sequência de DNA está envolvido na regulação do uso da informação genética.

Figura 1-Uma cadeia de DNA.


Do ponto de vista químico, o DNA é um polímero constituído por nucleótidos, cujo cerne é formado por açúcares e fosfato intercalados por ligações covalentes (do tipo fosfodiéster).
Dentro da célula, o DNA é organizado numa estrutura chamada cromossoma e o conjunto de cromossomas de uma célula forma o cariótipo. Antes da divisão celular os cromossomas são duplicados através de um processo chamado replicação.
Os seres eucariontes como os animais, as plantas e os fungos têm o seu DNA dentro do núcleo, enquanto que os procariontes como as bactérias têm-no disperso na membrana plasmática.
O DNA é responsável pela transmissão das características hereditárias de cada espécie.
Em organismos vivos, o DNA não existe como uma molécula única (fita simples), mas sim como um par de moléculas firmemente associadas. As duas longas fitas de DNA enrolam-se formando uma dupla hélice (figura 1). Os nucleótidos estão presentes em ambas as fitas da dupla hélice, unidos com nucleótidos da mesma fita por ligações fosfodiéster e à fita complementar através de pontes de hidrogénio formadas pelas suas bases.
A dupla hélice do DNA é estabilizada por pontes de hidrogénio, entre as bases presas às duas fitas. As quatro bases encontradas no DNA são a adenina (A), a citosina (C), a guanina (G) e a timina (T).
A dupla hélice é uma espiral dextra. Como as fitas de DNA giram uma ao redor da outra, elas deixam espaços entre cada cerne de fosfato, revelando os sítios das bases que estão localizadas na parte interna.

Figura 2 e 3 – No topo (figura 2), está a combinação Guanina-Citosina com três pontes de hidrogénio. Em baixo, está a combinação Adenina-Timina com duas pontes de hidrogênio.


Material

-Kiwi;
- Almofariz;
- Bisturi;
- Banho-maria (37º);
- Gaze;
- Proveta;
- Lâminas e lamelas;
- Tubo de ensaio;
- Água destilada;
- Detergente da louça;
- Cloreto de sódio;
- Etanol;
- Fucsina básica;
- Microscópio óptico.


Procedimento

1.Após ter descascado um kiwi, este foi cortado em pequenos cubos e esmagado no almofariz.
2.Foi adicionada uma solução composta por:
-100 ml de H2O;
-10 ml de detergente da louça;
-3 g de NaCl.
3.Continuámos o processo de esmagamento.
4.A preparação foi colocada em banho-maria (37º) durante 15 minutos.
5.Foi filtrado, através da gaze de forma a obter 5 ml de líquido para um tubo de ensaio.
6.Foi adicionado à preparação, 5 ml de etanol 96% a 5ºC.
7.Deixámos repousar até observarmos a ascensão de uma camada gelatinosa.
8.E observámos ao microscópio, utilizando a fucsina básica.


Observação

Após ter-se colocado o etanol na mistura, foi possível observar os filamentos do DNA, apesar de não estar em perfeitas condições.


Discussão dos resultados

O objectivo desta actividade experimental foi cumprido, visto que não houve nenhuma falha no processo utilizado, sendo possível a observação do filamento do DNA retirado do kiwi.
Depois desta actividade experimental fiquei a saber qual a função dos reagentes (cloreto de sódio, detergente e etanol).
A adição do cloreto de sódio, no inicio da actividade, proporciona um ambiente favorável ao DNA, pois o cloreto de sódio contribui com iões positivos que neutralizam a carga negativa do DNA. E também, serve para ajudar a romper as paredes celulares.
O adicionamento do detergente afecta as membranas plasmáticas, pois elas são constituídas por lípidos e com a ruptura das mesmas, o conteúdo celular solta-se e dispersa-se na solução.
Já o etanol faz com que o DNA não se dissolva, provocando a sua separação da solução aquosa inicialmente preparada, elevando-se para a camada alcoólica.
Isto acontece porque o DNA é menos denso que a água e que a mistura, fazendo com que este se mova lentamente para a superfície, em direcção ao etanol, deixando aparecer os pequenos filamentos.
Estes juntam-se através do etanol, formando uns filamentos esbranquiçados (DNA).
Quando por ultimo agitámos a mistura que continha o DNA, este soltou-se e precipitou-se.
Assim pude concluir que a molécula do DNA: é pouco solúvel, muito pouco densa, e que possui ligações muito fracas, isto porque estas são feitas através de pontes de hidrogénio (as ligações através do hidrogénio são pouco intensas do ponto de vista energético).

16 comentários:

Anónimo disse...

Os objectivos não devem estar dentro da introdução?

Anónimo disse...

o trabalho e´stá impecável, parabéns!! :D @

Anónimo disse...

o trabalho está impecável, parabéns!! :D @

Anónimo disse...

*o trabalho está impecável, parabéns!! :D @

copypast , nao é muito grave pois, não? :D

Anónimo disse...

este relatório ajudou.m imenso apesar de lhe faltar a conclusão

Anónimo disse...

boa introdução, ajudou :)

Anónimo disse...

Parabéns! Adorei o Relatório está fantástico!!! Ajudou-me bastante, mas não fiz cópia claro :D! Gosto de ter a minha avaliação... ;)

Anónimo disse...

Está 5*.
Ajudou-me a tirar algumas duvidas que tinha acerca do projecto laboratorial.
Assim já tenho uma ideia do que tenho que citar no meu relatório. Mas não se preocupe não foi copy. Apenas recolhi tópicos ou ideias chave.
Parabéns.

Anónimo disse...

falta a hipotese, como fazemos?

Anónimo disse...

este relatório esta um espetáculo se não fosse ele eu naõ tinha como arranjar a informação que faltava para acabar o meu , muito obrigado

Anónimo disse...

I used to be able to find good information from your blog posts.
Also visit my web blog :: topografía

Anónimo disse...

Please let me know if you're looking for a author for your site. You have some really great articles and I feel I would be a good asset. If you ever want to take some of the load off, I'd absolutely love
to write some content for your blog in exchange for a link back to mine.

Please blast me an e-mail if interested. Regards!
Here is my web site hainan airlines

sofia disse...

parabéns pelo trabalho!
ajudou-me muito no meu trabalho de casa de ciências ;)
obrigada!

Anónimo disse...

gostei muito

Anónimo disse...

obrigado ajudou imenso

Nastali Silva disse...

Não